輔助降血糖功能檢驗(yàn)方法

Method for the
Assessment of Assisting Blood Sugar Reduction Function

1.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

選用成年動(dòng)物,，選用小鼠（26   2g）或大鼠（180 20g）,，單一性別，大鼠每組8－12只,、小鼠每組10－15只,。

1.2材料

1.2.1試劑

四氧嘧啶（C₄H₂N₂O₄·H₂O,分子量160.08）或鏈脲佐菌素、地塞米松磷酸鈉注射液,、葡萄糖或醫(yī)用淀粉,、血糖測(cè)定試紙或試劑盒，胰島素,、甘油三酯,、總膽固醇測(cè)定試劑盒

1.2.2 高熱能飼料

豬油10% 、蔗糖15% ,、蛋黃粉15% 、酪蛋白5% ,、膽固醇1.2% ,、膽酸鈉0.2%、碳酸氫鈣0.6%、石粉0.4%,、鼠維持料52.6%

1.2.3儀器

血糖儀,、全自動(dòng)生化儀、可見光分光光度計(jì),、酶標(biāo)儀,、天平。

1.3劑量分組及受試樣品給予時(shí)間

實(shí)驗(yàn)設(shè)三個(gè)劑量組和一個(gè)模型對(duì)照組,，以人體推薦量的10倍（小鼠）或5倍（大鼠）為其中的一個(gè)劑量組,，另設(shè)二個(gè)劑量組，高劑量一般不超過30倍,，必要時(shí)設(shè)空白對(duì)照組,。同時(shí)設(shè)給予受試樣品高劑量的正常動(dòng)物組。受試樣品給予時(shí)間30天,，必要時(shí)可延長(zhǎng)至45天,。

1.4實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 正常動(dòng)物降糖實(shí)驗(yàn)

選健康成年動(dòng)物按禁食3－5小時(shí)的血糖水平分組，隨機(jī)選1個(gè)對(duì)照組和1個(gè)劑量組,。對(duì)照組給予溶劑,，劑量組給予高劑量濃度受試樣品，連續(xù)30天,，測(cè)空腹血糖值（禁食同實(shí)驗(yàn)前）,，比較兩組動(dòng)物血糖值。

1.4.2 高血糖模型降糖實(shí)驗(yàn)

方案一

1.4.2.1胰島損傷高血糖模型

1.4.2.1.1原理

四氧嘧啶（或鏈脲佐菌素）是一種細(xì)胞毒劑,，可選擇性地?fù)p傷多種動(dòng)物的胰島細(xì)胞,，造成胰島素分泌低下，引起實(shí)驗(yàn)性糖尿病,。

1.4.2.1.2造模方法

購(gòu)入成年動(dòng)物,，適應(yīng)1天后，隨機(jī)取15只動(dòng)物禁食3－5小時(shí),，測(cè)空腹血糖,，作為該批次動(dòng)物基礎(chǔ)血糖值。隨后動(dòng)物禁食24小時(shí)（自由飲水）,，注射四氧嘧啶（用前新鮮配制）造模,，小鼠45－50mg/kg BW.iv或125－130mg/kg BW.ip，大鼠50－80mg/kg BW.iv或120－160mg/kg BW.ip,。5－7天后動(dòng)物禁食3－5小時(shí),，測(cè)血糖，血糖值10－25mmol/L為高血糖模型成功動(dòng)物,。

1.4.2.1.3高血糖模型動(dòng)物降糖實(shí)驗(yàn)

選高血糖模型動(dòng)物按禁食3－5小時(shí)的血糖水平分組,，隨機(jī)選1個(gè)模型對(duì)照組和3個(gè)劑量組（組間差不大于1.1mmol/L）。劑量組給予不同濃度受試樣品，模型對(duì)照組給予溶劑,，連續(xù)30天,，測(cè)空腹血糖值（禁食同實(shí)驗(yàn)前），比較各組動(dòng)物血糖值及血糖下降百分率,。

                  （實(shí)驗(yàn)前血糖值－實(shí)驗(yàn)后血糖值）

血糖下降率%=--------------------------------------------×100％

                    實(shí)驗(yàn)前血糖值

1.4.2.1.4高血糖模型動(dòng)物糖耐量實(shí)驗(yàn)

劑量分組及受試樣品給予時(shí)間同1.4.2,。各組動(dòng)物禁食3－5小時(shí)，測(cè)定給葡萄糖或醫(yī)用淀粉前（即0小時(shí)）血糖值,，劑量組給予不同濃度受試樣品,，模型對(duì)照組給予同體積溶劑，15－20分鐘后各組經(jīng)口給予葡萄糖2.0g/kg BW或醫(yī)用淀粉3－5g/kg BW,，測(cè)定給葡萄糖后各組0.5,、2小時(shí)的血糖值或給醫(yī)用淀粉后1、2小時(shí)的血糖值,，觀察模型對(duì)照組與受試樣品組給葡萄糖或醫(yī)用淀粉后各時(shí)間點(diǎn)（0,、0.5、2小時(shí)）血糖值及血糖曲線下面積的變化,。

（0小時(shí)血糖＋0.5小時(shí)血糖）×0.5 （2小時(shí)血糖＋0.5小時(shí)血糖）×1.5

血糖曲線下面積＝——————————————— + ————————————————

                          2                                 2

方案二

1.4.2.2胰島素抵抗糖\脂代謝紊亂模型(任選其一)

1.4.2.2.1地塞米松誘導(dǎo)胰島素抵抗糖\脂代謝紊亂模型

1.4.2.2.1.1原理

糖皮質(zhì)激素具有拮抗胰島素生物效應(yīng)的作用,，可抑制靶組織對(duì)葡萄糖的攝取和利用，促進(jìn)蛋白質(zhì)和脂肪的分解及糖異生作用,，導(dǎo)致糖,、脂代謝紊亂，胰島素抵抗,，誘發(fā)實(shí)驗(yàn)性糖尿病,。

1.4.2.2.1.2試驗(yàn)方法

購(gòu)入健康雄性大鼠（150 20g），普通維持料適應(yīng)飼養(yǎng)3－5天,，禁食3－4小時(shí),，取尾血，測(cè)定空腹即給葡萄糖前（0小時(shí)）血糖值,，給2.5g/kgBW葡萄糖后測(cè)定0.5,、2小時(shí)血糖值，作為該批次動(dòng)物基礎(chǔ)值,。以0,、0.5小時(shí)血糖水平分5個(gè)組，即1個(gè)空白對(duì)照組,、1個(gè)模型對(duì)照組和3個(gè)劑量組,，每組15只?？瞻讓?duì)照組不做處理,，3個(gè)劑量組灌胃給予不同濃度受試樣品,，模型對(duì)照組給予同體積溶劑，連續(xù)35天,。各組給予維持料飼養(yǎng)，1周后模型對(duì)照組和3個(gè)劑量組更換高熱能飼料,，喂飼2周后,，模型對(duì)照組和3個(gè)劑量組在高熱能飼料基礎(chǔ)上分別給予地塞米松0.8mg/kgBW腹腔注射（0.008%地塞米松注射量1ml/100g體重），每日1次,，連續(xù)10－12天,。試驗(yàn)結(jié)束，各組動(dòng)物禁食3－4小時(shí),，檢測(cè)空腹血糖,、糖耐量、血清胰島素及膽固醇,、甘油三脂水平,。

1.4.2.2.1.3 觀察指標(biāo)

1.4.2.2.1.3.1 空腹血糖、糖耐量

各組動(dòng)物禁食3－4小時(shí),，測(cè)定空腹血糖即給葡萄糖前（0小時(shí)）血糖值,，劑量組給予不同濃度受試樣品，模型對(duì)照組給予同體積溶劑,，空白對(duì)照組不做處理,，15－20分鐘后各組經(jīng)口給予葡萄糖2.5g/kg BW，測(cè)定給葡萄糖后各組0.5,、2小時(shí)的血糖值,，若模型對(duì)照組0.5小時(shí)血糖值≥10mmol/L，或模型對(duì)照組0.5小時(shí),、2小時(shí)任一時(shí)間點(diǎn)血糖升高或血糖曲線下面積升高,，與空白對(duì)照組比較，差異有顯著性,，判定模型糖代謝紊亂成立,，在此基礎(chǔ)上，觀察模型對(duì)照組與受試樣品組空腹血糖,、給葡萄糖后（0.5,、2小時(shí)）血糖及0、0.5,、2小時(shí)血糖曲線下面積的變化,。

（實(shí)驗(yàn)前血糖值－實(shí)驗(yàn)后血糖值）

血糖下降率%=--------------------------------------------×100％

實(shí)驗(yàn)前血糖值

（0小時(shí)血糖＋0.5小時(shí)血糖）×0.5 （2小時(shí)血糖＋0.5小時(shí)血糖）×1.5

血糖曲線下面積＝——————————————— + ————————————————

                      2                                  2

1.4.2.2.1.3.2 膽固醇、甘油三脂

各組動(dòng)物禁食3－4小時(shí),，檢測(cè)血清膽固醇,、甘油三脂,，若模型對(duì)照組血清膽固醇或甘油三酯明顯升高，與空白對(duì)照組比較,，差異有顯著性,，判定模型脂代謝紊亂成立，在此基礎(chǔ)上,，觀察模型對(duì)照組與受試樣品組血脂變化,。

1.4.2.2.1.3.3
胰島素

各組動(dòng)物禁食3－4小時(shí)，檢測(cè)血清胰島素,，模型對(duì)照組與空白對(duì)照組比較胰島素抵抗指數(shù)無(wú)明顯下降,，且動(dòng)物糖/脂代謝紊亂成立，判定胰島素抵抗糖\脂代謝紊亂模型成功,。觀察模型對(duì)照組與受試樣品組胰島素抵抗情況,。

                                      血糖×胰島素

胰島素抵抗指數(shù) = 胰島素/22.5e^-㏑血糖  ≈ ——————————

                                              22.5

1.4.2.2.2四氧嘧啶誘導(dǎo)胰島素抵抗糖\脂代謝紊亂模型

1.4.2.2.2.1原理

高熱能飼料喂飼基礎(chǔ)上，輔以小劑量四氧嘧啶（C₄H₂N₂O₄·H₂O,分子量160.08）,，造成糖/脂代謝紊亂,，胰島素抵抗，誘發(fā)實(shí)驗(yàn)性糖尿病,。

1.4.2.2.2.2造模方法

購(gòu)入健康雄性大鼠（150 20g）,，普通維持料適應(yīng)飼養(yǎng)3－5天，禁食3－4小時(shí),，取尾血,，測(cè)定給葡萄糖前（即0小時(shí)）血糖值，給2.5g/kgBW葡萄糖后0.5,、2小時(shí)血糖值,，作為該批次動(dòng)物基礎(chǔ)值。以0,、0.5小時(shí)血糖水平分5個(gè)組,，即1個(gè)空白對(duì)照組、1個(gè)模型對(duì)照組和3個(gè)劑量組,，每組15只,。空白對(duì)照組不做處理,，3個(gè)劑量組灌胃給予不同濃度受試樣品,，模型對(duì)照組給予同體積溶劑，連續(xù)33天,。各組給予維持料飼養(yǎng),，1周后模型對(duì)照組和3個(gè)劑量組更換高熱能飼料，喂飼3周后,，模型對(duì)照組和3個(gè)劑量禁食24小時(shí)（不禁水）,，給予四氧嘧啶103－105mg/kgBW腹腔注射,，注射量1ml/100g體重。注射后繼續(xù)給予高熱能飼料喂飼3－5天,。試驗(yàn)結(jié)束,，各組動(dòng)物禁食3－4小時(shí)，檢測(cè)空腹血糖,、糖耐量,、血清胰島素及膽固醇、甘油三脂水平,。

1.4.2.2.2.3 觀察指標(biāo)

1.4.2.2.2.3.1空腹血糖、糖耐量

各組動(dòng)物禁食3－4小時(shí),，測(cè)定空腹血糖即給葡萄糖前（0小時(shí)）血糖值,，劑量組給予不同濃度受試樣品,，模型對(duì)照組給予同體積溶劑,，空白對(duì)照組不做處理，15－20分鐘后各組經(jīng)口給予葡萄糖2.5g/kg BW，測(cè)定給葡萄糖后各組0.5、2小時(shí)的血糖值，若模型對(duì)照組0.5小時(shí)血糖值≥10mmol/L，或模型對(duì)照組0.5小時(shí),、2小時(shí)任一時(shí)間點(diǎn)血糖升高或血糖曲線下面積升高，與空白對(duì)照組比較,，差異有顯著性，判定模型糖代謝紊亂成立,，在此基礎(chǔ)上,，觀察模型對(duì)照組與受試樣品組空腹血糖、給葡萄糖后（0.5、2小時(shí)）血糖及0,、0.5,、2小時(shí)血糖曲線下面積的變化。

（實(shí)驗(yàn)前血糖值－實(shí)驗(yàn)后血糖值）

血糖下降率%=--------------------------------------------×100％

實(shí)驗(yàn)前血糖值

（0小時(shí)血糖＋0.5小時(shí)血糖）×0.5 （2小時(shí)血糖＋0.5小時(shí)血糖）×1.5

血糖曲線下面積＝——————————————— + ————————————————

                           2                               2

1.4.2.2.2.3.2 膽固醇,、甘油三脂

各組動(dòng)物禁食3－4小時(shí),，檢測(cè)血清膽固醇、甘油三脂,，若模型對(duì)照組血清膽固醇或甘油三酯明顯升高,，與空白對(duì)照組比較，差異有顯著性,，判定模型脂代謝紊亂成立,，在此基礎(chǔ)上，觀察模型對(duì)照組與受試樣品組血脂變化,。

1.4.2.2.2.3.3
胰島素

各組動(dòng)物禁食3－4小時(shí),，檢測(cè)血清胰島素，模型對(duì)照組與空白對(duì)照組比較胰島素抵抗指數(shù)無(wú)明顯下降,，且動(dòng)物糖/脂代謝紊亂成立,，判定胰島素抵抗糖\脂代謝紊亂模型成功。觀察模型對(duì)照組與受試樣品組胰島素抵抗情況,。

                                          血糖×胰島素

胰島素抵抗指數(shù) = 胰島素/22.5e^-㏑血糖  ≈ ——————————

                                              22.5

1.5數(shù)據(jù)處理及結(jié)果判定

一般采用方差分析,，但需按方差分析的程序先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，方差齊,，計(jì)算F值,，F值< F_0.05，結(jié)論：各組均數(shù)間差異無(wú)顯著性,；F值≥F_0.05,，P≤0.05，用多個(gè)實(shí)驗(yàn)組和一個(gè)對(duì)照組間均數(shù)的兩兩比較方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)；對(duì)非正態(tài)或方差不齊的數(shù)據(jù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換,，待滿足正態(tài)或方差齊要求后,，用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)；若變量轉(zhuǎn)換后仍未達(dá)到正態(tài)或方差齊的目的,，改用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì),。

1.5.1指標(biāo)判定

1.5.1.1 正常動(dòng)物降糖試驗(yàn)

血糖指標(biāo)：空腹血糖受試樣品劑量組與對(duì)照組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，判定對(duì)正常動(dòng)物血糖無(wú)影響,。

1.5.1.2 高血糖模型降糖試驗(yàn)

空腹血糖指標(biāo)：模型成立的前提下,，受試樣品劑量組與模型對(duì)照組比較，空腹血糖下降或血糖下降百分率升高有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,，判定該受試樣品空腹血糖指標(biāo)結(jié)果陽(yáng)性,。

糖耐量指標(biāo)：模型成立的前提下，受試樣品劑量組與模型對(duì)照組比較,，在給葡萄糖或醫(yī)用淀粉后0.5,、2小時(shí)任一時(shí)間點(diǎn)血糖下降（或血糖下降百分率升高）有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，或0,、0.5,、2小時(shí)血糖曲線下面積降低有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，判定該受試樣品糖耐量指標(biāo)結(jié)果陽(yáng)性,。

血脂指標(biāo)：模型成立的前提下,，受試樣品劑量組與模型對(duì)照組比較，血清膽固醇或甘油三酯下降有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,，可判定該受試樣品降血脂指標(biāo)陽(yáng)性,。

1.5.2 結(jié)果判定

方案一：空腹血糖和糖耐量二項(xiàng)指標(biāo)中一項(xiàng)指標(biāo)陽(yáng)性,，且對(duì)正常動(dòng)物空腹血糖無(wú)影響,，即可判定該受試樣品輔助降血糖功能動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性。

    方案二：空腹血糖和糖耐量二項(xiàng)指標(biāo)中一項(xiàng)指標(biāo)陽(yáng)性,，且血脂（總膽固醇,、甘油三酯）無(wú)明顯升高，對(duì)正常動(dòng)物空腹血糖無(wú)影響,，即可判定該受試樣品輔助降血糖功能動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性,。

1.6 注意事項(xiàng)

1.6.1 為了使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物糖代謝功能狀態(tài)盡量保持一致，也為了準(zhǔn)確地按體重計(jì)算受試樣品的用量,，實(shí)驗(yàn)前動(dòng)物應(yīng)嚴(yán)格禁食（不禁水）,，實(shí)驗(yàn)前后禁食條件應(yīng)一致，鼠類在禁食的同時(shí)應(yīng)更換襯墊物,。

1.6.2 如用血清樣品進(jìn)行測(cè)定,，應(yīng)于取血后30分鐘內(nèi)分離血清，分離后血清的含糖量在6小時(shí)內(nèi)不變。用血清制備的無(wú)蛋白血濾液可保存48小時(shí)以上,。

1.6.3 高濃度的還原性物質(zhì)如Vit C亦能與色素原競(jìng)爭(zhēng)游離氧,，干擾反應(yīng)，使結(jié)果偏低,。血紅蛋白能使過氧化氫過早分解,，亦干擾反應(yīng)，致使測(cè)得血糖值偏低,。故對(duì)已溶血的全血或血清必須制備無(wú)蛋白濾液后,，再進(jìn)行測(cè)定。

1.7 血糖測(cè)定方法

用試紙或試劑盒,，按說明書操作,；若自行配制試劑，按下列方法操作：

1.7.1  原理

葡萄糖氧化酶是一種需氧脫氫酶,，能催化葡萄糖生成葡萄糖酸和過氧化氫,，后者在過氧化物酶作用下放出氧，使4-氨基安替比林與酚氧化縮合,，生成紅色醌類化合物,，可在波長(zhǎng)505nm比色測(cè)定。

               葡萄糖氧化酶

      葡萄糖－－－－－－－－→葡萄糖酸＋過氧化氫

                                     過氧化物酶

      過氧化氫＋酚＋4-氨基安替比林－－－－－－→紅色醌類化合物

1.7.2 試劑配制

磷酸鹽緩沖液（0.2mol/L,，pH7.0）

0.2mol/L Na₂HPO₄61mL,，0.2mol/L KH₂PO₄39mL混合即可。

酶試劑葡萄糖氧化酶400u,，過氧化物酶0.6mg,，4-氨基安替比林10mg，疊氮鈉100mg,，加磷酸鹽緩沖液至100mL,，PH調(diào)至7。冰箱存放至少可穩(wěn)定2個(gè)月,。

酚試劑酚100mg溶于100mL蒸餾水中,。

酶混合試劑取等量酶試劑和酚試劑混合。在冰箱中可存放1個(gè)月,。

葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液儲(chǔ)存液：無(wú)水D-葡萄糖（A.R.）在烤箱中80℃烤4小時(shí),，冷卻后，存放于干燥器中至恒重,。精確稱取2g以0.25%苯甲酸溶液溶解并移入100mL容量瓶中,，再用苯甲酸溶液稀釋至100mL。

應(yīng)用液：在100mL容量瓶中準(zhǔn)確加入儲(chǔ)存液5mL,，再用0.25%苯甲酸溶液稀釋至100mL,，即1mg/mL應(yīng)用液,。

蛋白沉淀劑溶解磷酸氫二鈉 10g、鎢酸鈉10g,、氯化鈉9g于800mL蒸餾水中,，加入1mol/L鹽酸125mL，并用蒸餾水稀釋至1000mL,。

1.7.3 操作步驟

取蛋白沉淀劑1mL加入血漿（血清）50μL混勻,。室溫放置7分鐘后，離心,，取上清液（無(wú)蛋白血濾液）測(cè)定,。葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液亦進(jìn)行同樣處理。混勻后,，37℃水浴保溫15分鐘,，用空白管調(diào)零點(diǎn)，在波長(zhǎng)505nm處比色,。

1.7.4 結(jié)果計(jì)算

測(cè)定管OD

血糖含量（mmol/L）= ——————— ×100/18                         

                      標(biāo)準(zhǔn)管OD

2 人體試食試驗(yàn)

2.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)采用隨機(jī)分組,，組間和自身兩種對(duì)照設(shè)計(jì)。

2.2 受試產(chǎn)品

受試產(chǎn)品必須是具有定型包裝,、標(biāo)明服用方法和服用量的定型產(chǎn)品,；安慰劑除功效成分外，在劑型,、口感,、外觀和包裝上與受試產(chǎn)品保持一致。

2.3 受試者選擇

2.3.1納入標(biāo)準(zhǔn)

    選擇經(jīng)飲食控制或口服降糖藥治療后病情較穩(wěn)定,，不需要更換藥物品種及劑量,，僅服用維持量的成年II型糖尿病患者(DM)，即空腹血糖≥7mmol/L（126mg/dl）或餐后2小時(shí)血糖≥11.1mmol/L
（200mg/dl）,；也可選擇空腹血糖5.6－7mmol/L（100－126mg/dl）或餐后2小時(shí)血糖7.8－11.1mmol/L（140－200mg/dl）的糖調(diào)節(jié)受損（IGR）人群,。

2.3.2排除標(biāo)準(zhǔn)

2.3.2.1 Ⅰ型糖尿病病人。

2.3.2.2 年齡在18歲以下或65歲以上,，妊娠或哺乳期婦女,，對(duì)受試樣品過敏者,。

2.3.2.3 有心,、肝、腎等主要臟器并發(fā)癥,，或合并有其它嚴(yán)重疾病,，精神病患者，服用糖皮質(zhì)激素或其它影響血糖藥物者,。

2.3.2.4 不能配合飲食控制而影響觀察結(jié)果者 ,。

2.3.2.5 近3個(gè)月內(nèi)有糖尿病酮癥、酸中毒以及感染者。

2.3.2.6 短期內(nèi)服用與受試功能有關(guān)的物品,，影響到對(duì)結(jié)果的判斷者,。

2.3.2.7 凡不符合納入標(biāo)準(zhǔn)，未按規(guī)定服用受試樣品,，或資料不全影響觀察結(jié)果者,。

2.4 受試者分組

采用自身和組間兩種對(duì)照設(shè)計(jì)。根據(jù)隨機(jī)盲法的要求進(jìn)行分組,。按受試者的糖化血紅蛋白或糖化血清蛋白及血糖水平隨機(jī)分為試食組和對(duì)照組,，盡可能考慮影響結(jié)果的主要因素如病程、服藥種類（磺脲類,、雙胍類）等,，進(jìn)行均衡性檢驗(yàn)，以保證組間的可比性,。每組受試者不少于50例,。

2.5 試驗(yàn)方法

試驗(yàn)前對(duì)每一位受試者按性別、年齡,、不同勞動(dòng)強(qiáng)度,、理想體重參照原來生活習(xí)慣規(guī)定相應(yīng)的飲食，試食期間堅(jiān)持飲食控制,，治療糖尿病的藥物種類和劑量不變,。試食組在服藥的基礎(chǔ)上，按推薦服用方法服用量每日服用受試樣品,，對(duì)照組在服藥的基礎(chǔ)上可服用安慰劑或采用空白對(duì)照,。受試樣品給予時(shí)間2個(gè)月，必要時(shí)可延長(zhǎng)至4個(gè)月,。

2.6 觀察指標(biāo)

2.6.1 安全性指標(biāo)

2.6.1.1 一般狀況體征 包括精神,、睡眠、飲食,、大小便,、血壓等

2.6.1.2 血、尿,、便常規(guī)檢查

2.6.1.3 肝,、腎功能檢查

2.6.1.4 胸透、心電圖,、腹部B超檢查（僅試驗(yàn)前檢查一次）

2.6.2功效指標(biāo)

2.6.2.1癥狀觀察

詳細(xì)詢問病史,，了解患者飲食情況，用藥情況,，活動(dòng)量,，觀察口渴多飲,、多食易饑、倦怠乏力,、多尿等主要臨床癥狀,，按癥狀輕重積分，于試食前后統(tǒng)計(jì)積分值,，并就其主要癥狀改善（改善1分為有效）,，觀察臨床癥狀改善率。

臨床癥狀積分表

2.6.2.2空腹血糖

觀察試食前后空腹血糖值,、空腹血糖下降百分率,、空腹血糖有效率。

2.6.2.3餐后2小時(shí)血糖

觀察試食前后食用100g精粉饅頭后2小時(shí)血糖值,、餐后2小時(shí)血糖下降百分率,、餐后2小時(shí)血糖有效率。

2.6.2.4糖化血紅蛋白或糖化血清蛋白

觀察試食前后糖化血紅蛋白或糖化血清蛋白變化,。

2.6.2.5血脂

觀察試食前后血清總膽固醇,、血清甘油三酯水平。

2.7 注意

2.7.1 血清(漿)中的葡萄糖能與白蛋白及其他血清蛋白分子末端的氨基上發(fā)生非酶促糖化反應(yīng)而形成高分子酮胺結(jié)構(gòu),。此酮胺結(jié)構(gòu)能在堿性環(huán)境中與硝基四氮唑蘭(NBT)發(fā)生還原反應(yīng)生成藍(lán)紫色物質(zhì),，以1- 脫氧-1- 嗎啡啉果糖(DMF)作標(biāo)準(zhǔn)參照物在540 nm 波長(zhǎng)處(530 nm－550
nm)進(jìn)行比色測(cè)定，求得樣本中果糖胺的濃度,。參考值為1.7 mmol/L－2.5 mmol/L,。由于血清中白蛋白的半衰期約21 d，所以糖化血清蛋白測(cè)定可反映患者過去2－3 周平均血糖水平,。 糖尿病患者的糖化血清蛋白的增加比糖化血紅蛋白迅速,，
當(dāng)血糖得到較好控制時(shí)，糖化血清蛋白的下降也比糖化血紅蛋白迅速,， 因此能較早地提供血糖控制信息,。糖化血清蛋白更能靈敏地反映近期糖尿病患者血糖的波動(dòng)情況。它的敏感度高,，特異強(qiáng),。并不受年齡，飲食,，藥物,，妊娠等因素的影響，對(duì)血糖濃度的臨時(shí)波動(dòng)反應(yīng)不敏感,，是診斷糖尿病和較長(zhǎng)時(shí)間血糖控制水平研究的良好指標(biāo),。標(biāo)本溶血對(duì)糖化血清蛋白的測(cè)定結(jié)果有較大影響,，血清中1 g/L
的血紅蛋白可導(dǎo)致GSP 測(cè)定結(jié)果增高0.6 mmol/L 左右,。

2.7.2 糖化血紅蛋白是經(jīng)過緩慢的,，不可逆的，非酶促反應(yīng)而結(jié)合形成的產(chǎn)物,，其濃度與紅細(xì)胞壽命(平均120天)和該時(shí)期內(nèi)血糖平均濃度有關(guān),，不受每天葡萄糖波動(dòng)的影響，也不受運(yùn)動(dòng)或食物的影響,，可反映患者抽血前2個(gè)月－3個(gè)月的平均血糖水平,，是判斷糖尿病長(zhǎng)期控制的良好指標(biāo)。糖化血紅蛋白在健康人體內(nèi)的波動(dòng)范圍很小(0.1%－0.2%),，正常值為4%－6%,。

2.8數(shù)據(jù)處理和結(jié)果判定

凡自身對(duì)照資料可以采用配對(duì)t檢驗(yàn)，兩組均數(shù)比較采用成組t檢驗(yàn),，后者需進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn),，對(duì)非正態(tài)分布或方差不齊的數(shù)據(jù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿足正態(tài)方差齊后,，用轉(zhuǎn)換的數(shù)據(jù)進(jìn)行t檢驗(yàn),；若轉(zhuǎn)換數(shù)據(jù)仍不能滿足正態(tài)方差齊要求，改用t’檢驗(yàn)或秩和檢驗(yàn),；方差齊但變異系數(shù)太大（如CV>50％）的資料應(yīng)用秩和檢驗(yàn),。

2.8.1 血糖下降幅度

                       試驗(yàn)前空腹血糖 — 試驗(yàn)后空腹血糖

空腹血糖下降百分率 = ————————————————— ×100%

                              試驗(yàn)前空腹血糖

                         試驗(yàn)前餐后2小時(shí)血糖 — 試驗(yàn)后餐后2小時(shí)血糖

餐后2小時(shí)血糖下降百分率 = ———————————————————   ×100%

試驗(yàn)前餐后2小時(shí)血糖

2.8.2 糖化血紅蛋白或糖化血清蛋白下降幅度

                          試驗(yàn)前糖化血紅蛋白 — 試驗(yàn)后糖化血紅蛋白

糖化血紅蛋白下降百分率 = ————————————————————×100%                              
試驗(yàn)前糖化血紅蛋白

                           試驗(yàn)前糖化請(qǐng)紅蛋白 — 試驗(yàn)后糖化血清蛋白

糖化血清蛋白下降百分率 = —————————————————————×100%

                         試驗(yàn)前糖化血清蛋白

2.8.3功效判定標(biāo)準(zhǔn)：

有效：⑴試驗(yàn)后空腹血糖恢復(fù)正常（≤5.6 mmol/L），或空腹血糖下降幅度≥10%

      ⑵試驗(yàn)后餐后2小時(shí)血糖恢復(fù)正常(≤7.8 mmol/L),，或餐后2小時(shí)血糖下降幅度≥10%

    無(wú)效：未達(dá)到有效標(biāo)準(zhǔn)

                       空腹血糖有效例數(shù)

空腹血糖下降有效率 = ———————————×100%

                       空腹血糖觀察例數(shù)

                           餐后2小時(shí)血糖有效例數(shù)

餐后2小時(shí)血糖下降有效率 = ———————————×100%

                           餐后2小時(shí)血糖觀察例數(shù)

2.8.4指標(biāo)判定

2.8.4.1 空腹血糖：

①試驗(yàn)前后自身比較,，空腹血糖下降差異有顯著性，且試驗(yàn)后平均血糖下降幅度≥10％,；②試驗(yàn)后試食組空腹血糖值下降或空腹血糖下降幅度升高與對(duì)照組比較,，差異有顯著性； ③試驗(yàn)后試食組空腹血糖下降有效率升高與對(duì)照組比較,，差異有顯著性,。滿足上述3個(gè)條件，可判定該受試樣品空腹血糖指標(biāo)結(jié)果陽(yáng)性,。

2.8.4.2 餐后2小時(shí)血糖：

①試驗(yàn)前后自身比較,，餐后2小時(shí)血糖下降差異有顯著性，且試驗(yàn)后平均血糖下降幅度≥10％,；②試驗(yàn)后試食組餐后2小時(shí)血糖值下降或餐后2小時(shí)血糖下降幅度升高與對(duì)照組比較,，差異有顯著性；③試驗(yàn)后試食組餐后2小時(shí)血糖下降有效率升高與對(duì)照組比較,，差異有顯著性,。滿足上述3個(gè)條件，可判定該受試樣品餐后2小時(shí)血糖指標(biāo)結(jié)果陽(yáng)性,。

2.8.4.3 糖化血紅蛋白（或糖化血清蛋白）：

①試驗(yàn)前后自身比較,，糖化血紅蛋白（或糖化血清蛋白）下降差異有顯著性,；②試驗(yàn)后試食組糖化血紅蛋白（或糖化血清蛋白）值下降或糖化血紅蛋白（或糖化血清蛋白）下降幅度升高與對(duì)照組比較，差異有顯著性,。滿足上述2個(gè)條件,，可判定該受試樣品糖化血紅蛋白（或糖化血清蛋白）指標(biāo)結(jié)果陽(yáng)性。

2.8.4.4 血清膽固醇：

①試驗(yàn)前后自身比較,，血清膽固醇下降差異有顯著性,；②試驗(yàn)后試食組血清膽固醇下降與對(duì)照組比較，差異有顯著性,。滿足上述2個(gè)條件,，可判定該受試樣品血清膽固醇指標(biāo)結(jié)果陽(yáng)性。

2.8.4.5 血清甘油三酯：

①試驗(yàn)前后自身比較,，血清甘油三酯下降差異有顯著性,；②試驗(yàn)后試食組血清甘油三酯下降與對(duì)照組比較，差異有顯著性,。滿足上述2個(gè)條件,，可判定該受試樣品血清甘油三酯指標(biāo)結(jié)果陽(yáng)性。

2.8.5結(jié)果判定

空腹血糖,、餐后2小時(shí)血糖,、糖化血紅蛋白（或糖化血清蛋白）、血脂四項(xiàng)指標(biāo)均無(wú)明顯升高,，且空腹血糖,、餐后2小時(shí)血糖兩項(xiàng)指標(biāo)中一項(xiàng)指標(biāo)陽(yáng)性，對(duì)機(jī)體健康無(wú)影響,，可判定該受試樣品具有輔助降血糖功能的作用,。